La plataforma CRISPR más precisa permite el examen de genes más grande en los cerebros del mouse vivo

En las últimas décadas, los investigadores biomédicos y los neurocientíficos han desarrollado técnicas avanzadas crecientes para el estudio y el cambio de los procesos neurofagiológicos. Estos incluyen CRISPR (repetición palindrómica corta interpaseada regular agrupada), ratas, ratas, pez cebra y moscas de frutas, una herramienta sofisticada para editar ciertos genes.

Investigadores de la Universidad de California, San Francisco, bajo el liderazgo de Martin Campman, recientemente introdujeron una plataforma de detección CRISPR más específica que puede aplicarse directamente al tejido vivo, lo que una vez permite una detección de genes más grande. Se introdujo una nueva estrategia de secuenciación de episoma AAV (Crave-SEA) conocida como detección de CRISPR Un papel Publicado NeurocienciaEl

“Los sistemas basados ​​en células humanas son valiosos, pero la complejidad del cerebro no puede capturarse por completo”, dijo el coautor del periódico Biswa Ramani al Medical Express. “Las ratas a menudo tienen el modelo más efectivo para muchos Enfermedad neurológica Porque su cerebro almacena el tipo de tipos de células y organizaciones que no pueden replicarse en ningún plato “”

Ramani y sus colegas en el Campman Lab estaban buscando una herramienta que permitiera al mouse más rápido unos pocos cientos o incluso miles de modificadores genéticos en el cerebro sin la necesidad de sus procesos o herramientas extremadamente caras. Esta plataforma nacional se puede utilizar para realizar estudios a gran escala y sistemáticos que participan genéticamente en ratas de ingeniería para duplicar aspectos específicos de los trastornos neurológicos humanos.

“Nos inspiramos pensar en los conceptos fuera de la caja para resolver las pantallas CRISPR en las células que se cultivan en platos de Petri”. “Biswa y yo deseamos tener una herramienta donde pudiéramos hacer pantallas CRISPR directamente al cerebro. Después de investigar el método disponible, nos dimos cuenta de que necesitamos hacerlo usted mismo”.

El objetivo principal de este estudio reciente fue crear una plataforma experimental que respalde miles de genes en diferentes regiones del cerebro, así como notar efectivamente la población de ciertas células. El equipo quería que esta técnica también se aplique a Vivo (por ejemplo, lanzado) Ganado)

Ramani explicó: “Nuestra plataforma de detección de CRISPR gana el virus relacionado con el adeno (AAV) para suministrar a SGRNA al cerebro intacto del ratón, así como da el poder de separar y separar los genomas AAV restantes del cerebro después de un tiempo”, explicó Ramani.

“Luego lo asociamos con herramientas genéticas que nos permiten ‘seleccionar’ y solo sGRNA que estaban presentes en interés de las células especificadas solo permiten que la” captura “”.

A través de la combinación de estos dos métodos distintos, Ramani, Rose y sus colegas pudieron estudiar los efectos de ahorrar miles de genes en varios millones de células en el cerebro. Significativamente, se permitió que su enfoque se centrara en su población celular específica, como neuronas, astrospos o subtipos de neuronas especializadas.

“Crave-Six SGRNGS especialmente diseñado para un ratón vivo al cerebro donde interrumpen cierto gen, generalmente una de las diferentes células vecinas”, dijo Rose.

“Lo hacemos con miles de genes diferentes al mismo tiempo Cerebro La región o la población de la célula. “

Al comparar las técnicas de CRISPR convencionales, estos investigadores han ganado SGRNA o ARN de guía única. Estas son moléculas de ARN de ingeniería que cambian su secuencia y “registran” su presencia en ciertos tipos de células. Estos son los cambios que finalmente permiten a los investigadores cubrir sus pantallas CRISPR adecuadamente para cubrir la población de ciertas células.

Ramani dijo: “Estamos más fascinados de ver cómo se elevaron los genes no favorables de la neurona de nuestra biblioteca SGRNA de gran tamaño”, dijo Ramani “, dijo Ramani.

“Esta es la escala de nuestro enfoque a la escala de la escala, que fue posible antes de que fuera posible. Al extender el procedimiento a través de múltiples ratas, podemos aumentar la reproductividad”.

La plataforma de detección genética escalable creada por este equipo de investigadores pronto puede centrarse en el nuevo estudio centrándose en una amplia gama de procesos genéticos y neurales. En el futuro, puede ayudar a descubrir procesos celulares y moleculares específicos que contribuyen al desarrollo de ciertas enfermedades o trastornos neuropsiquiátricos.

“Nuestro estudio establece una base al identificar los genes neuronales necesarios de la línea de base, ubicados en nuestros próximos genes definidos que se vuelven necesarios en términos de estrés, incluidos los modelos de neurodizenación y en la población neuronal seleccionada”, dijo Ramani. “Ahora vamos a refinar la plataforma para extender su utilidad a otros fenotipos”.

“También planeamos realizarlo en los modelos de ratones de la enfermedad nerviosa, además de aplicar el diente de anhelo a la población de otras células”, agregó Rose.

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